بررسی مکانیسم سمیت سلولی و آپوپتوزی عصاره هیدروالکلی کورم زعفران بر رده سلولی گلایوبلاستوم مولتی فرم

هدف: امروزه، ترکیبات گیاهی با خواص ضد سرطانی و مکانیسم های چندتایی مورد عالقه دانشمندان قرار گرفته اند. مطالعات نشانداده است که برای درمان بیماریهای چند عاملی مانند سرطان باید روی ترکیباتی با چند مکانیسم تاکید داشت که یکی از این ترکیبات جالب توجه، عصاره زعفران میباشد. از همین رو در این تحقیق، ارزیابی اثرات عصاره هیدروالکلی کورم زعفران به عنوان داروی ضدتومور بر قابلیت حیات سلولهای سرطان گالیوبالستوم بررسی شد.
مواد و روشها: در این مطالعه عصاره کورم زعفران )L. sativus Crocus )به روش خیسانده تهیه شد. سلولهای سرطان 1 گالیوبالستوما رده سلولی U87 از بانک سلولی پاستور تهیه گردید و چندین بار مورد پاساژ قرار داده تا سلولها به تعداد لازم رسیدند. سایتوتوکسی دارو و عصاره کورم زعفران هر یک بهطور جداگانه و همزمان براساس تست رنگ سنجی MTT با غلظت های معین از دارو و عصاره در تیمارهای 72،48،24 ساعت انجام شد و میزان تغییرات آپوپتوژنیک غلظت های 120 و 240 میکروگرم بر میلیلیتر عصاره و شاهد به روش فلوسایتومتری و پروپیدیومیداید بررسی شد. همچنین سنجش ROS هر یک از غلظت های عصاره و شاهد به روش فلوریمتری و رنگ آمیزی DA-DCF انجام شد.
نتایج : نتایج آزمون MTT نشان داد که بیشترین مقدار سمیت مربوط به تیمار 400 میکروگرم بر میلی لیتر عصاره با سمیت حدودا 90 درصد و سپس تیمار 200 میکروگرم بر میلی لیتر با سمیت 60 درصد بود. بیشترین مقدار سمیت داروی تموزوالمید مربوط به تیمار 125 میکروموالر با سمیت 55 درصد سلولها بود. بیشترین مقدار آپوپتوز تیمارهای استفاده شده در 24 و 48 ساعت مربوط به تیمار 240 میکروگرم بر میلی لیتر عصاره بود که براساس دادههای فلوسایتومتری به ترتیب 87 و 95 درصد سلولها در این تیمار کشته شدند. آزمون ROS در ساعت 6 نشان داد بیشترین مقدار جذب در غلظت 240 به دست آمد و تیمار 120 میکروگرم بر میلی لیتر عصاره هیدروالکلی کورم زعفران از لحاظ عدد جذب در کالس b قرار گرفت.
نتیجه گیری: نتایج حاصل از تیمار 72،48،24 ساعت عصاره کورم زعفران و تموزوالمید نشان از وجود اثرات ضد توموری آنها بر روی سلول سرطانی گالیوبالستوما داشت و نتایج وابسته به دوز و زمان بودند و در بررسی نتایج میزان اثرات سایتوتوکسیک و آپوپتوژنیک و اکسیداتیو سلولی نشان از معناداری در سطح )0001.0<P )داشت و مشخص شد که عصاره کورم زعفران میتوانداسترس اکسیداتیو در رده سلول سرطانی U87 را تا حد قابل مالحظه ای افزایش دهد.

Objective
Nowadays, plant components with anti-cancer effects and multi-mechanisms are desired by scientists. Studies have shown which to control of multi-factors diseases like cancer, should emphasize on anti-cancer multi-mechanisms components. One of the most common cancers in today’s societies is glioblastoma. Therefore, in this research, the effect of hydro alcoholic extract of saffron corm as an anti-tumor drug on the survival of glioblastoma cells was investigated.

Materials and methods
In this study, extract of corm saffron (Crocus sativus L.) was prepared by softening method. The U87 cell line (human primary glioblastoma cell line) was prepared from a pasteurized cell bank, multiple times passage, and the cells reached the required number. Cytotoxic drugs and extract of saffron curry were performed simultaneously and simultaneously based on MTT colorimetric assay with certain concentrations of drug and extract in 24.48, and 72 hours. The apoptotic changes of 120, and 240 mg ml-1 of extract and control were measured by using flow cytometry and propidiodideid. In addition, ROS was measured for each of the concentrations of extract and control by fluorimetry and staining with DCF-DA.

Results
Results of MTT test shown that the highest cytotoxic effect was related to 400 μg ml-1 hydro alcoholic corm extract with 90 % toxicity and treatment 200 μg ml-1 with about 60 % toxicity stayed on second position. Temzolamide drug 125 μM had the highest toxicity of effect 55 %. The highest amounts of apoptotic cell death 87 and 95 % were related to 240 μg ml-1 hydro alcoholic corm extract in 24 and 48 hours after treat respectively based on flow cytometry data. ROS test at 6 hours after treat shown that the highest amount of adsorption were related to 240 and 120 μg ml-1 hydro alcoholic corm extracts respectively.

Conclusion
The results 24, 48, and 72 hours treatment of saffron corn extract and temzolamide showed their anti-tumor effects on glayobastoma cancer cells, and the results were dose-dependent and time-dependent. The results of the cytotoxic, apoptotic and oxidative stress determined that saffron corm extract have anti-tumor effects on U87 cancer cell line significantly (P <0.0001) level and can increase oxidative stress on them.