رویکرد نوین Real-time PCR کمی برای تعیین تقلب گلرنگ (Carthamus tinctorius) در زعفران (Crocus sativus)

تشخیص و کمی‌سازی تقلب گلرنگ در زعفران با روش‌های مبتنی بر DNA:این پژوهش با هدف توسعه روش‌های مبتنی بر DNA برای تشخیص و کمی‌سازی گلرنگ (Carthamus tinctorius L.) به عنوان یک تقلب‌کننده رایج در زعفران انجام شد. روش‌های PCR اختصاصی گونه و real-time PCR با رنگ EvaGreen که به ناحیه ITS گلرنگ هدف‌گیری می‌کردند، با موفقیت پیشنهاد شدند.این آزمون‌ها امکان دستیابی به حساسیت مطلق ۲ پیکوگرم DNA گلرنگ (معادل ~۱.۴ کپی DNA) و حساسیت نسبی ۰.۱٪ وزنی گلرنگ در زعفران (Crocus sativus L.) را فراهم کردند.یک رویکرد real-time PCR نرمال‌شده نیز در بازه ۰.۱ تا ۲۰٪ (وزنی) گلرنگ در زعفران پیشنهاد شد که با موفقیت اعتبارسنجی و روی نمونه‌های تجاری زعفران (کلاله‌ها، پودر و ادویه‌جات) اعمال گردید.از بین ۱۹ نمونه تجاری، سه نمونه مثبت گلرنگ بودند، هرچند در سطوح پایین‌تر از حد تشخیص، که نشان‌دهنده آلودگی متقاطع به جای تقلب عمدی است.در این کار، ابزارهای خاص، حساس و دقیق برای اصالت‌سنجی زعفران پیشنهاد شد. به بهترین اطلاع ما، این اولین تلاش موفق برای کمی‌سازی گلرنگ با رویکرد مبتنی بر DNA است.

This work intended to develop DNA-based methods to detect and quantify safflower as an adulterant in saffron. Species-specific PCR and real-time PCR with EvaGreen dye targeting the ITS region of Carthamus tinctorius L. (safflower) were successfully proposed. The assays allowed absolute and relative sensitivities of 2 pg of safflower DNA (∼1.4 DNA copies) and 0.1% of safflower in saffron (Crocus sativus L.), respectively. A normalized real-time PCR approach was also proposed in the range of 0.1–20% (w/w) of safflower in saffron, which was successfully validated and applied to commercial saffron samples (stigmas, powders and seasonings). From 19 samples, three were positive to safflower, though at levels below the limit of detection, suggesting cross-contamination rather than adulteration. In this work, specific, sensitive and accurate tools were proposed to authenticate saffron. To the best of our knowledge, this is the first successful attempt to quantify safflower by a DNA-based approach.