توسعه یک روش سرولوژیک حساس برای تشخیص Burkholderia gladioli pv. gladioli، عامل پوسیدگی باکتریایی بنه زعفران

ریزسازواره‌های بیماری‌زا باعث بیماری‌های عفونی گیاهی می‌شوند که بهره‌وری محصول را محدود کرده و خسارات اقتصادی به بار می‌آورند. تشخیص زودهنگام، شناسایی پاتوژن و کنترل مؤثرتر از طریق راهبردهای مدیریت تلفیقی آفات را ممکن می‌سازد. Burkholderia gladioli pv. gladioli (Bgg) باعث پوسیدگی باکتریایی بنه زعفران (BCR) می‌شود، بیماری که تشخیص آن دشوار است و اثرات ویرانگری با نرخ تخریب مزرعه تا 80٪ و خسارات سنگین عملکرد مربوطه دارد. در این مطالعه، دو جدایه Bgg (A و B) از طریق تجزیه و تحلیل تصاویر TEM و SEM و سپس شناسایی مولکولی توسط PCR رنا 235 شناسایی شدند. یک پادتن چندگانه خاص Bgg تولید و برای آزمایش‌های مستقیم به آلکالین فسفاتاز متصل شد و برای آزمایش‌های غیرمستقیم با استفاده از پادتن ثانویه از هیچ اتصالی استفاده نشد. از الایزا، وسترن بلات، دات بلات و تصویربرداری ایمونوفلوئورسانس برای ارزیابی کارایی و ویژگی پادتن تولید شده استفاده شد. پادتن تولید شده به طور خاص به Bgg متصل شد و واکنش‌های متقاطع بسیار کمی با باکتری‌های مرتبط ساختاری داشت. دات بلات به عنوان یک آزمایش مزرعه‌ای مناسب، ارزان و سریع نشان داده شد. این کار گامی مهم به سوی تشخیص و جلوگیری از گسترش BCR است.

Pathogenic microorganisms cause infectious plant diseases, which limit crop productivity and cause economic losses. Early detection enables improved pathogen recognition and more effective control through integrated pest management strategies. Burkholderia gladioli pv. gladioli (Bgg) cause saffron bacterial corm rot (BCR), a hard-to-detect disease, which has a devastating effect with up to 80 % field destruction rates and corresponding heavy yield losses. In this study, two isolates of Bgg (A and B) were identified via TEM and SEM image analysis followed by molecular identification by 235 rRNA PCR. A Bgg-specific polyclonal antibody was developed and was conjugated to alkaline phosphatase for direct assays, and no conjugation was used for indirect assays employing a secondary antibody. ELISA, Western blot, dot blot and immunofluorescence imaging were used to evaluate the efficacy and specificity of the developed antibody. The raised antibody bound specifically to Bgg with very low cross-reactivities to structurally related bacteria. Dot blot was shown as a suitable, cheap, and rapid field test. This work represents an important step forward to diagnose and prevent the spread of BCR.