ارزیابی مکانیسم سیتوتوکسیک و آپوپتوزی عصاره هیدروالکلی بنه زعفران بر سلول‌های گلیوبلاستوم مولتی‌فرم

هدفامروزه، ترکیبات گیاهی با اثرات ضد سرطانی و مکانیسم‌های چندگانه توسط دانشمندان مورد توجه قرار گرفته‌اند. مطالعات نشان داده‌اند که برای کنترل بیماری‌های چندعاملی مانند سرطان، باید بر ترکیبات ضد سرطانی با مکانیسم‌های چندگانه تأکید شود. یکی از رایج‌ترین سرطان‌ها در جوامع امروزی گلیوبلاستوما است. بنابراین، در این تحقیق، اثر عصاره هیدروالکلی کورم زعفران به‌عنوان داروی ضد تومور بر بقای سلول‌های گلیوبلاستوما مورد بررسی قرار گرفت.

مواد و روش‌هادر این مطالعه، عصاره کورم زعفران (Crocus sativus L.) به روش نرم‌سازی تهیه شد. رده سلولی U87 (رده سلولی گلیوبلاستوما انسانی اولیه) از یک بانک سلولی پاستوریزه تهیه شد، چندین بار پاساژ داده شد و سلول‌ها به تعداد مورد نیاز رسیدند.داروهای سیتوتوکسیک و عصاره کاری زعفران به‌طور همزمان و بر اساس آزمایش رنگ‌سنجی MTT با غلظت‌های مشخصی از دارو و عصاره در زمان‌های 24، 48 و 72 ساعت انجام شدند. تغییرات آپوپتوتیک عصاره با غلظت‌های 120 و 240 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر و گروه کنترل با استفاده از فلوسایتومتری و پروپیدیوم یدید اندازه‌گیری شد. علاوه بر این، ROS برای هر یک از غلظت‌های عصاره و کنترل با فلوریمتر و رنگ‌آمیزی با DCF-DA سنجیده شد.

نتایجنتایج آزمایش MTT نشان داد که بیش‌ترین اثر سیتوتوکسیک مربوط به عصاره هیدروالکلی غده به غلظت 400 میکروگرم بر میلی‌لیتر با 90٪ سمیت بوده و درمان با 200 میکروگرم بر میلی‌لیتر با حدود 60٪ سمیت در رتبه دوم قرار گرفت.داروی تمزولاماید 125 میکرومول بیشترین سمیت را با اثر 55٪ داشت. بیشترین میزان مرگ سلولی آپوپتوتیک 87 و 95٪ به استخراج هیدروالکلی کورم با غلظت 240 میکروگرم بر میلی‌لیتر مربوط بود که به ترتیب در 24 و 48 ساعت پس از درمان براساس داده‌های فلوسایتومتری مشاهده شد. آزمایش ROS در 6 ساعت پس از درمان نشان داد که بالاترین میزان جذب مربوط به استخراج‌های هیدروالکلی کورم با غلظت‌های 240 و 120 میکروگرم بر میلی‌لیتر به ترتیب بود.

نتیجه‌گیری: نتایج درمان با عصاره کورم زعفران و تمزولاماید در 24، 48 و 72 ساعت نشان داد که این مواد اثرات ضدتوموری بر روی سلول‌های سرطانی گلیوبلاستوم دارند و این اثرات وابسته به دوز و زمان بود. نتایج سمّیت سلولی، آپوپتوز و استرس اکسیداتیو نشان داد که عصاره کورم زعفران به طور قابل توجهی (P <0.0001) اثرات ضدتوموری بر روی سلول‌های سرطانی U87 دارد و می‌تواند استرس اکسیداتیو را بر روی آن‌ها افزایش دهد.

“Objective
Nowadays, plant components with anti-cancer effects and multi-mechanisms are desired by scientists. Studies have shown which to control of multi-factors diseases like cancer, should emphasize on anti-cancer multi-mechanisms components. One of the most common cancers in today’s societies is glioblastoma. Therefore, in this research, the effect of hydro alcoholic extract of saffron corm as an anti-tumor drug on the survival of glioblastoma cells was investigated.

Materials and methods
In this study, extract of corm saffron (Crocus sativus L.) was prepared by softening method. The U87 cell line (human primary glioblastoma cell line) was prepared from a pasteurized cell bank, multiple times passage, and the cells reached the required number. Cytotoxic drugs and extract of saffron curry were performed simultaneously and simultaneously based on MTT colorimetric assay with certain concentrations of drug and extract in 24.48, and 72 hours. The apoptotic changes of 120, and 240 mg ml-1 of extract and control were measured by using flow cytometry and propidiodideid. In addition, ROS was measured for each of the concentrations of extract and control by fluorimetry and staining with DCF-DA.

Results
Results of MTT test shown that the highest cytotoxic effect was related to 400 μg ml-1 hydro alcoholic corm extract with 90 % toxicity and treatment 200 μg ml-1 with about 60 % toxicity stayed on second position. Temzolamide drug 125 μM had the highest toxicity of effect 55 %. The highest amounts of apoptotic cell death 87 and 95 % were related to 240 μg ml-1 hydro alcoholic corm extract in 24 and 48 hours after treat respectively based on flow cytometry data. ROS test at 6 hours after treat shown that the highest amount of adsorption were related to 240 and 120 μg ml-1 hydro alcoholic corm extracts respectively.
Conclusion
The results 24, 48, and 72 hours treatment of saffron corn extract and temzolamide showed their anti-tumor effects on glayobastoma cancer cells, and the results were dose-dependent and time-dependent. The results of the cytotoxic, apoptotic and oxidative stress determined that saffron corm extract have anti-tumor effects on U87 cancer cell line significantly (P <0.0001) level and can increase oxidative stress on them.”