اولین گزارش از پوسیدگی بنه زعفران (Crocus sativus L.) ناشی از Fusarium tricinctum در هند

روش انجام تحلیل فیلوژنتیک بر اساس مقاله Bhatti و همکاران (F. Bhatti et al.) و با استفاده از روش تامورا و همکاران (۲۰۱۳) انجام شد. موقعیت‌های تکاملی با استفاده از نرم‌افزار TreeGraph 2 (Stöver و Müller، ۲۰۱۰) ثبت گردید. درخت فیلوژنتیک، جدایه‌ها را درون شاخه F. tricinctum خوشه‌بندی کرد و آن‌ها را به‌وضوح از سایر گونه‌های نزدیک Fusarium جدا نمود (شکل ۲). این نتایج هویت سویه‌های جداسازی‌شده را به عنوان F. tricinctum تأیید کرد.
بیماری‌زایی با تلقیح بنه‌های سالم زعفران با سوسپانسیون اسپور قارچ (۱۰×۱۰۵ اسپور در گرم) که به ۱۰۰ گرم خاک اتوکلاوشده در هر گلدان اضافه شد، تأیید گردید. تیمار شاهد با آب مقطر استریل تیمار شد. هر تیمار به مدت ۲۸ روز پس از تلقیح در شرایط کنترل‌شده نگهداری شد و گلدان‌ها در روزهای متناوب با آب استریل آبیاری شدند تا رطوبت مورد نیاز برای عفونت قارچی حفظ شود. نتایج نشان داد که تمام سویه‌ها علائم پوسیدگی بنه را القا کردند که این امر بیماری‌زایی آن‌ها را تأیید می‌کند. سویه‌های F. tricinctum CSP10، CSP19، CSP20 و CSP21 بیماری‌زایی بیشتری با شاخص بیماری (DI) ۲/۶ نشان دادند، در حالی که CSP22 و F. oxysporum CSE15 (که به عنوان پاتوژن شناخته‌شده C. sativus به عنوان کنترل مثبت استفاده شد) هر دو شاخص بیماری ۲/۳ داشتند. تمام بنه‌های تلقیح‌شده علائم پوسیدگی مشخص را نشان دادند، در حالی که بنه‌های تیمار شاهد بدون علامت باقی ماندند (شکل ۱).

F. Bhatti et al. method to conduct phylogenetic analysis (Tamura et al. 2013). The evolutionary positions were documented using Tree Graph 2 (Stöver and Müller 2010). The phylogenetic tree clustered the isolates within the F. tricinctum clade, clearly separating them from other closely related Fusarium species (Fig. 2). These results confirmed the identity of the isolated strains as F. tricinctum. Pathogenicity was confirmed by inoculating healthy saffron corms with fungal spore suspensions (1× 105 spores g− 1) applied to 100 g of autoclaved soil per pot. Controls were treated with sterile distilled water. Each treatment was maintained under controlled conditions for 28 days post-inoculation, and pots were watered with sterile water on alternate days to maintain the required moisture for fungal infection. We found that all strains induced corm rot symptoms, confirming their virulence. F. tricinctum CSP10, CSP19, CSP20, and CSP21exhibited greater virulence, with a Disease Index (DI) of 2.6 compared to CSP22 and F. oxysporum CSE15, a known pathogen of C. sativus used as a positive control, both with a DI of 2.3. All inoculated corms developed the characteristic rot symptoms while the untreated control corms remained symptomless (Fig. 1).