یک پروتکل ساده برای استخراج متابولیت از زعفران و کاربرد آن در احراز هویت نمونه‌های بازار توسط fingerprinting HPLC

زعفران که ادویه‌ای گران‌قیمت است، به شدت مستعد تقلب می‌باشد. کروکین، پی‌کروکروسین و سفرانال که معمولاً به عنوان نشانگرهای شیمیایی برای احراز اصالت استفاده می‌شوند، از نظر پایداری و یکتایی نسبت به زعفران دچار کمبود هستند. سفرانال مصنوعی ارزان‌قیمت نگرانی دیگری در زمینه تقلب ایجاد می‌کند. بنابراین، شناسایی متابولیت‌های دیگر برای احراز اصالت زعفران ضروری است. روش‌های موجود برای استخراج متابولیت‌ها پرزحمت، وقت‌گیر و نیازمند مقدار زیادی نمونه هستند. ما پروتکل ساده‌ای را برای استخراج متابولیت‌ها از تنها ۵ میلی‌گرم زعفران با استفاده از ۱۰۰ میکرولیتر حلال در مدت ۲ ساعت گزارش می‌کنیم. کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) متابولیت‌ها با جریان ۱ میلی‌لیتر بر دقیقه و ۷۰٪ استونیتریل به مدت ۱۰ دقیقه و آشکارسازی در ۳۰۸ نانومتر، اثرانگشتی از HPLC به‌دست داد که مشخصه متمایز پرچم زعفران است. این اثرانگشت پس از حداقل ۶ سال نگهداری در دمای اتاق پایدار باقی ماند و به‌طور موفقیت‌آمیزی نمونه‌های واقعی بازار را از نمونه‌های غیرواقعی تفکیک کرد.

“Being an expensive spice, saffron is highly prone to adulteration. Crocin, picrocrocin and safranal, which are commonly used as chemical markers for authentication, suffer from a lack of stability and uniqueness to saffron. Inexpensive synthetic safranal poses an additional concern in adulteration. Therefore, identification of other metabolites becomes essential for saffron authentication. Available metabolite extraction methods are laborious, time-consuming and require a large quantity of samples. We report a simple protocol for extracting the metabolites from as little as 5 mg of saffron using 100 μl of solvent in 2 h. High-performance liquid chromatography (HPLC) of the metabolites at 1 ml·min-1 flow rate with 70% acetonitrile for 10 min and detection at 308 nm yielded an HPLC fingerprint specific to saffron’s stigma. The fingerprint was stable after at least 6 years of storage at room temperature and successfully differentiated the authentic from inauthentic market samples. “