آنالیز UHPLC زعفران (Crocus sativus L.): بهینه‌سازی جداسازی با استفاده از شیمی‌سنجی و شناسایی استرهای کروستین جزئی

کروماتوگرافی مایع با کارایی بسیار بالا (UHPLC) همراه با آشکارساز آرایه دیودی (DAD) برای بهبود جداسازی و شناسایی استرهای مونو و بیس گلوکوزیلی کروستین (کروسین‌ها)، اجزای اصلی رنگی زعفران (Crocus sativus L.) و سایر اجزای قطبی به کار رفت. روشولوژی سطح پاسخ (RSM) برای بهینه‌سازی رزولوشن کروماتوگرافی روی ستون Kinetex C18 (Phenomenex) با در نظر گرفتن اثر ترکیبی دمای ستون، سرعت جریان فاز متحرک و شیب گرادیان غلظت خطی فاز متحرک استفاده شد. یک طرح آزمایش عاملی کامل سه سطحی برای شناسایی ترکیبات مناسب عوامل فوق اتخاذ شد. تأثیر شرایط جداسازی بر رزولوشن 22 پیک مجاور به طور همزمان توسط یک شبکه عصبی مصنوعی چند لایه (ANN) مدل‌سازی شد که در آن از یک نمایش رشته بیتی برای شناسایی آنالیت‌های هدف استفاده شد. کروماتوگرام جمع‌آوری شده تحت شرایط جداسازی بهینه، تعداد بیشتری از استرهای کروستین را در مقایسه با آنهایی که قبلاً توسط داده‌های طیف‌سنجی جرمی مشخص شده‌اند و معمولاً توسط HPLC شناسایی می‌شوند، نشان داد. آنالیزهای UHPLC انجام شده روی ستون جدید Luna Omega Polar C18 (Phenomenex) تعداد زیاد مشتقات کروستین را تأیید کرد. کارهای بیشتری برای کسب داده‌های طیف‌سنجی جرمی و روشن‌سازی ساختار شیمیایی اجزای جدیدly یافت شده زعفران در حال انجام است.

Ultra-high performance liquid chromatography (UHPLC) coupled with diode array detection (DAD) was applied to improve separation and detection of mono- and bis-glucosyl esters of crocetin (crocins), the main red-colored constituents of saffron (Crocus sativus L.), and other polar components. Response surface methodology (RSM) was used to optimize the chromatographic resolution on the Kinetex C18 (Phenomenex) column taking into account of the combined effect of the column temperature, the eluent flow rate and the slope of a linear eluent concentration gradient. A three-level full-factorial design of experiments was adopted to identify suitable combinations of the above factors. The influence of the separation conditions on the resolutions of 22 adjacent peaks was simultaneously modelled by a multi-layer artificial neural network (ANN) in which a bit string representation was used to identify the target analyses. The chromatogram collected under the optimal separation conditions revealed a higher number of crocetin esters than those already characterized by means of mass-spectrometry data and usually detected by HPLC. Ultra-high performance liquid chromatography analyses carried out on the novel Luna Omega Polar C18 (Phenomenex) column confirmed the large number of crocetin derivatives. Further work is in progress to acquire mass-spectrometry data and to clarify the chemical structure to the newly found saffron components.