شناسایی ایزومرهای آپوکاروتنوئید کروسین و کروستین موجود در عصاره خام زعفران (Crocus Sativus) از طریق کروماتوگرافی مایع مجهز به طیف سنجی جرمی

متابولیت‌های اصلی در زعفران، کروسین و کروسیتین از خانواده آپو-کاروتنوئیدها هستند. شدت رنگ و کیفیت زعفران عمدتاً به حضور کروسین‌ها بستگی دارد که شکل گلیکوزیل‌شده استری کروسیتین توسط آنزیم گلیکوزیل‌ترانسفراز هستند. هدف از این مطالعه، توصیف این متابولیت‌ها در عصاره‌های متانولی و کلروفرمی کلاله‌های زعفران در مرحله گلدهی با استفاده از LC-APCI-MS است. شناسایی ایزومرهای سیس و ترانس کروسین و کروسیتین با استفاده از سه پارامتر مانند طیف‌های جرمی ثبت شده در حالت یون منفی، زمان ماندگاری و نسبت جذب مربوط به هر متابولیت انجام شد. تغییرپذیری این پارامترها امکان شناسایی ایزومر کروسین‌ها را بر اساس موقعیت اتصال و تعداد مولکول‌های UDP-گلوکز و ژنتوبیوزیل ژنتوبیوزیل متصل به ساختار کروسیتین فراهم کرد. کروسین‌ها جزء اصلی شناسایی شده بودند، زیرا جزء قطبی هستند که در گروه‌های کاروتنوئیدها و شکل استری شده گلوکز کروسیتین (β\betaβ-D-گلوکوپیرانوزیل) و ژنتوبیوز (β\betaβ-D-گلوکوپیرانوزیل-D-گلوکز) طبقه‌بندی می‌شوند. همچنین یون‌های دارای بار دوگانه برای ترانس ایزومرهای کروسین-۴ به دلیل تقارن بالای مولکول‌هایشان یافت شد. بر اساس داده‌های جمع‌آوری شده، دستگاه کروماتوگراف مورد استفاده در این پروژه دقیق‌ترین و حساس‌ترین ابزار برای بررسی اجزای طبیعی گیاهان مانند زعفران است، همچنین APCI-MS مورد استفاده در حالت یون منفی، کارآمدترین روش برای تمایز اشکال فضایی مختلف کروسین بر اساس قطعات یون مربوط به کاهش اتصال ژنسیل و ژنتوبیوزیل و همچنین کسر مولکولی است.

The main metabolites in saffron are the Apo-carotenoids’ Crocin and Crocetin. Color intensity and quality of saffron mostly depend on the presence of Crocins that are glycosylated steric form of Crocetin by glycosyltransferase enzyme. The aim of this study is the characterization of these metabolites in methanolic and chloroformic extracts of saffron stigmas during anthesis stage by LCAPCI-MS. Identification of cis and trans isomers of Crocin and Crocetin was done by three parameters such as mass spectra registered in the negative ion mode, retention time and absorption ratio related to each metabolites. The variability of these parameters made it possible to detect the Crocins isomer with regard to the attached position and the number of UDP-glucose and Gentiobiosyl molecules to Crocetin structure. Crocins was the mainly detected components as there are polar components that are classified in the carotenoids groups and the sterified form of Crocetin Glucose (β-D-Glucopyranosyl) and Gentiobiose (β-D-Glucopyranosyl-D-Glucose). Also doubly charged ions were found for transisomers of Crocin-4, due to the high symmetry of their molecules. Based on the data gathered, the applied chromatograph Machin in this project is accurate and it is most sensitive tools to investigate about plants’ natural components like saffron, also the used APCI-MS in negative ions mode is the most efficient method to distinguish different steric forms of Crocin based on the ion’s fragments related to united reduction of glycosyl and gentiobiosyl as well as molecular fractions.