توسعه روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا با طیف‌سنجی جرمی tandem برای شناسایی محتوای تقلبی رایج در زعفران

اهداف این مطالعه به توسعه یک روش کارآمد و قابل اعتماد برای تخمین مواد تقلبی رایج در زعفران با شناسایی اجزای مشخصه آن‌ها به منظور تضمین اثر بخشی و استفاده منظم آن به عنوان یک گیاه دارویی بسیار ارزشمند اختصاص داشت. روش‌ها یک روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا همراه با طیف‌سنجی جرمی جفتی (HPLC-MS/MS) انتخابی و حساس توسعه یافت تا میزان مواد تقلبی رایج در زعفران از کلاله ذرت، گل داوودی و گلرنگ از طریق تعیین همزمان ترکیبات خاص شامل آلانتوئین، اسید کلروژنیک (ChA) و هیدروکسی‌سافلور زرد A (HSYA) برآورد شود. شناسایی اوج هر ترکیب هدف از طریق یون‌های محصول به دست آمده با استفاده از کروماتوگرام جرم یون‌های محصول تقویت شده تحریک شده توسط مانیتورینگ واکنش‌های متعدد تأیید شد. اعتبارسنجی روش از نظر خطی بودن، حساسیت، تکرارپذیری، دقت و پایداری به طور سیستماتیک مطابق با دستورالعمل‌های رسمی انجام شد.یافته‌های کلیدی
جداسازی رضایت‌بخش سه مؤلفه بر روی یک ستون C18 (4.6 × 250 میلی‌متر، 5 میکرومتر) با فاز متحرک متانول–استونیتریل–استات آمونیوم (3.0 میلی‌مول) در الوتیاسیون گرادیانی به دست آمد. شناسایی این ترکیبات خاص با استفاده از حالت پایش چندگانه واکنش به همراه تأیید تکمیلی یون محصول تقویت‌شده انجام شد. روش ایجاد شده از نظر خطیت، حساسیت، قابلیت تکرار، دقت و بازدهی اعتبارسنجی شد و نتایج رضایت‌بخشی برای تشخیص حساس سه ترکیب هدف ارائه داد.

نتیجه‌گیری
با شناسایی ترکیبات خاص آلانتوئین، ChA و HSYA در یک مرتبه، می‌توان به طور مؤثر مواد تقلبی گل‌ذرت، داوودی و گلرنگ را در زعفران شناسایی و تخمین زد. این اولین گزارشی است که بر توسعه روشی ساده، حساس و عملی برای شناسایی و تخمین مواد تقلبی رایج در زعفران تمرکز دارد و برای کاربرد گسترده‌تر ارائه شده است.

Objectives:
This study aimed to develop an efficient and reliable method for estimating common adulterants in saffron by detecting their characteristic components to warrant its efficacy and regular use as a highly valuable medicinal herb.
Methods:
A selective and sensitive high-performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) method was developed to estimate the common adulterants in saffron from corn stigma, chrysanthemum and safflower through the simultaneous determination of specific constituents including allantoin, chlorogenic acid (ChA) and hydroxysafflor yellow A (HSYA). Peak identification of each target compound was confirmed from product ions obtained using multiple reaction monitoring triggered enhanced product ions mass chromatogram. Method validation in terms of linearity, sensitivity, reproducibility, accuracy and stability was systematically performed according to official guidelines. Key findings
Satisfactory separation of the three components was achieved on a C18 column (4.6 × 250 mm, 5 μm) with methanol–acetonitrile–ammonium acetate (3.0 mM) as the mobile phase at gradient elution. The identification of these specific constituents was accomplished using the multiple reaction monitoring mode in combination with enhanced product ion supplementary confirmation. The established method was validated in terms of linearity, sensitivity, reproducibility, accuracy and recovery, which were found satisfactory for sensitive detection of the three target compounds.
Conclusions:
By detecting the specific constituents allantoin, ChA and HSYA in one run, the adulterants of corn stigma, chrysanthemum and safflower can be effectively identified and estimated in saffron. This is the first report on developing a simple, sensitive and operational method for the identification and estimation of common adulterants of saffron, that was forwarded for broaden application.