توسعه روش زیست‌تحلیلی و مطالعه اعتبارسنجی عصاره نوروپروتکتیو زعفران کشمیری با استفاده از کروماتوگرافی مایع فوق سریع-طیف‌سنجی جرمی تاندم

زعفران کشمیر (Crocus sativus L.) که همچنین به عنوان زعفران هندی شناخته می‌شود، یک گیاه دارویی مهم آسیایی با کاربردهای محافظتی و درمانی در سلامت مغز است. ترکیبات بیواکتیو اصلی در زعفران کشمیر یا هندی (KCS) و عصاره آن (CSE) شامل آپوکاروتنوئیدها پیکروکروسین (PIC) و سافرنال (SAF) به همراه کاروتنوئیدها، استرهای کروستین (کروسین‌ها) و کروستین‌ها هستند. استانداردسازی کروماتوگرافی مایع فوق سریع (UFLC)-آرایه فتو دیود حضور بیومارکرهای PIC، ترنس-4-GG-کروسین (T4C)، ترنس-3-Gg-کروسین (T3C)، سیس-4-GG-کروسین (C4C)، ترنس-2-gg-کروسین (T2C)، ترنس-کروسیتین (TCT) و SAF در CSE را تأیید کرد.

اهداف این مطالعه توسعه و اعتبارسنجی یک روش حساس و سریع UFLC-تاندوم طیف سنجی جرمی برای شناسایی PIC و SAF همراه با T4C و TCT در پلاسما موش با استانداردهای داخلی (IS) بودند. منحنی‌های کالیبراسیون خطی بودند (R2 > 0.990).با حد پایین کمی‌سازی (LLOQ) برابر با ۱۰ نانوگرم در میلی‌لیتر. دقت روش مبتنی بر آزمون UFLC-MS/MS (RSD، کمتر از ۱۵٪) و صحت (RE، −۱۱.۰۳ تا ۹.۹۶) در سطوح کنترل کیفی آنالیتی (QC) کاملاً در محدوده معیارهای پذیرش بود و بازیابی‌های عالی (۹۱.۱۸–۱۰۶.۸۶٪) در نمونه‌های پلاسما مشاهده شد. این روش برای بررسی پارامترهای فارماکوکینتیک درون‌تنی پس از تجویز خوراکی ۴۰ میلی‌گرم بر کیلوگرم CSE در موش‌های صحرایی (n = 6) اعمال شد. متابولیت فعال TCT و T4C، PIC، SAF برای اولین بار به همراه T3C، C4C، T2C توسط این روش بیوانالیتیکی معتبر کمی‌سازی شدند، که برای مطالعات پیش‌بالینی/بالینی CSE به عنوان یک مکمل غذایی بالقوه نورومحافظ مفید خواهد بود.

“: Kashmir saffron (Crocus sativus L.), also known as Indian saffron, is an important Asian medicinal plant with protective therapeutic applications in brain health. The main bioactive in Kashmir or Indian Saffron (KCS) and its extract (CSE) are apocarotenoids picrocrocin (PIC) and safranal (SAF) with carotenoids, crocetin esters (crocins), and crocetins. The ultra-fast liquid chromatography(UFLC)- photodiode array standardization confirmed the presence of biomark ers PIC, trans-4-GG-crocin (T4C), trans-3-Gg-crocin (T3C), cis-4-GG-crocin (C4C), trans-2-gg-crocin (T2C), trans-crocetin (TCT), and SAF in CSE.

This study’s objectives were to develop and validate a sensitive and rapid UFLC-tandem mass spectrometry method for PIC and SAF along T4C and TCT in rat plasma with internal standards (IS). The calibration curves were linear (R 2 > 0.990), with the lower limit of quantification (LLOQ) as 10 ng/mL. The UFLC-MS/MS assay-based precision (RSD, <15%) and accuracy (RE, −11.03–9.96) on analytical quality control (QC) levels were well within the acceptance criteria with excellent recoveries (91.18–106.86%) in plasma samples. The method was applied to investigate the in vivo pharmacokinetic parameters after oral administration of 40 mg/kg CSE in the rats (n = 6). The active metabolite TCT and T4C, PIC, SAF were quantified for the first time with T3C, C4C, T2C by this validated bioanalytical method, which will be useful for preclinical/clinical trials of CSE as a potential neuroprotective dietary supplement”