تعامل ماتریس پلیمری پلی اتیلنگلیکول (PEG) با رنگ مصنوعی نارنجی آکریدین و طبیعی زعفران در پارامترهای قابلیت زنده مانی و فعالیت فاگوسیتی

لکوسیت‌ها سلول‌هایی هستند که در خون وجود دارند، در مغز استخوان تولید می‌شوند و وظیفه دفاعی بدن را دارند. آن‌ها می‌توانند به سلول‌های چند هسته‌ای (PMNs) و سلول‌های تک هسته‌ای (MNs) تقسیم شوند و این گروه دوم در تحقیقات ایمنی‌شناسی به‌طور گسترده‌ای مورد استفاده قرار می‌گیرد و در موارد عفونت افزایش می‌یابد. در این زمینه، برای مدت طولانی در تحقیقات مربوط به فرآیندهای فاگوسیتوز، رنگ‌آمیزی با آکریدید اورنج به عنوان یک رنگ با حساسیت بالا استفاده می‌شود که سلول‌های زنده و مرده را به‌طور متفاوت رنگ‌آمیزی می‌کند. روش رنگ‌آمیزی با آکریدید اورنج قبلاً در ادبیات به‌خوبی توصیف شده است و استفاده از آن به‌خاطر سمّی بودنش به‌سرعت قابل کمیت‌گذاری است.

در برزیل، گونۀ زردچوبه به‌عنوان زعفران معروف است و ریزوم آن پودری زرد تولید می‌کند که به‌طور گسترده‌ای در داروشناسی، به‌عنوان ادویه و رنگ طبیعی استفاده می‌شود. از این نظر، یک روش جدید رنگ‌آمیزی سلولی آزمایش شد که از آکریدید اورنج در غلظت‌های مختلف و همچنین زعفران به‌عنوان رنگ طبیعی سلول استفاده می‌کند.به منظور تمدید این فرآیند فلورسانس، از پلی اتیلن گلیکول (PEG) استفاده شد که این قابلیت را دارد که ساختارهای متخلخل تشکیل دهد، سرعت آزادسازی را بهبود بخشد و توانایی جذب ترکیبات آلی که عملکردهای بیولوژیکی را بهبود می‌بخشند نشان دهد.

برای این مطالعه، 39 نمونه خون محیطی (8 میلی‌لیتر) از افراد بالینی سالم در لوله‌های حاوی EDTA جمع‌آوری شد. جمعیت‌های سلول‌های تک‌هسته‌ای خون محیطی با استفاده از روش گرادیان چگالی با فی‌کول-پاک جدا شدند و پس از سانتریفیوژ در 1600 دور در دقیقه به مدت 40 دقیقه، حلقه فاگوسیت بریده شد، دو بار در PBS شسته شد، سلول‌ها شمارش و تنظیم شدند. زعفران و رنگ آکریدین (AA که با PEG جذب شده یا نشده) در غلظت‌های 100ng/mL و 100pg/mL در زمان‌های 0 ساعت، 24 ساعت و 168 ساعت استفاده شد. آزمایش در پنج گروه انجام شد: گروه فقط سلول‌ها، سلول‌ها + PEG، سلول‌ها + رنگ آکریدین، سلول‌ها + زعفران و سلول‌ها + PEG + رنگ آکریدین.در تحلیل ریولوژیکی، همان گروه‌ها مورد آزمایش قرار گرفتند و noted که هم ویسکوزیته و هم جریان در حضور PEG، AA و زعفران تغییر نکردند. در زنده‌مانی سلول‌ها، تمام گروه‌ها همگن بودند و شاخص زنده‌مانی بالای 90% بود. در تحلیل فاگوسیتوز، مشاهده شد که برای غلظت‌های ng/mL بدون PEG (33.74 ± 0.50) و با PEG (36.98 ± 0.27) تفاوتی وجود ندارد (p <0.05). با این حال، وقتی گروه‌ها را در مقیاس pg/mL تحلیل کردیم (p <0.0001)، تفاوتی بین گروه‌های با PEG (41.28 ± 0.41) و بدون حضور پلیمر (50.11 ± 0.56) مشاهده کردیم. تحلیل فاگوسیتوز گروه سلول‌ها + EPEC (17.6 ± 2.30) با گروهی که شامل سلول‌ها، زردچوبه و EPEC بود (48.8 ± 6.97)، نشان داد که نرخ‌های فاگوسیتوز بالایی نسبت به گروه کنترل (سلول‌ها + EPEC) وجود دارد.

برای تحلیل شاخص میکروب‌کشی، همان گروه‌هایی که در بلع میکروبی تحلیل شده بودند مورد استفاده قرار گرفتند، جایی که تفاوت معناداری بین گروه‌های تحلیل شده وجود نداشت (p > 0.05). در تحلیل‌های آنیون و SOD نیز تفاوت معناداری وجود ندارد، تنها SOD گروهی که زعفران مصرف کرده است تفاوت نشان می‌دهد (p < 0.05). این نتایج پلی اتیلن گلیکول (PEG) جذب شده به رنگ اکرادین نارنجی را در غلظت pg/mL نشان می‌دهند و انتشار تغییر یافته‌ای برای مدت حداکثر 168 ساعت نشان می‌دهند و بر روی فرآیندهای سلولی تأثیری ندارند و زعفران زمین نقش رنگ‌زا را ایفا می‌کند، اما در برخی فعالیت‌های عوامل بیولوژیکی، مانند بلع میکروبی و SOD، تداخل ایجاد می‌کند و بر اهمیت مطالعات بیشتر برای استفاده از آن تأکید می‌کند.

Leukocytes are cells present in the blood, produced in the bone marrow, with the body’s defense function. They can divide into polymorphonuclear cells (PMNs) and mononuclear cells (MNs), and this second group is widely used in immunological investigations, increasing in number in cases of infections. In this sense, for a long time in investigations in phagocytic processes, acridine orange is used as a dye with high sensitivity, staining live and dead cells differently. The acridine orange staining method is already well described in the literature and its use is quick to quantify due to its toxicity.

In Brazil, the tuber of the turmeric plant is popularly known as saffron, and its rhizome produces a yellow powder, widely used in medicine, as a spice and natural color. In this sense, a new cell staining method was tested, using acridine orange in different concentrations and also saffron as a natural cell dye. In order to prolong this fluorescence process, polyethylene glycol (PEG) was used, which has the capacity to form porous structures, improving the release speed and showing the ability to adsorb organic compounds that improve biological functions.

For this study, 39 peripheral blood samples (8mL) were collected from clinically healthy individuals in tubes with EDTA. Peripheral blood mononuclear cell populations were separated by density gradient using Ficoll-Paque, after being centrifuged at 1600rpm for 40 minutes, the phagocyte ring removed, washed twice in PBS, the cells counted and adjusted. Saffron and acridine orange (AA adsorbed or not with PEG) were used in concentrations of 100ng / mL and 100pg / mL, at 0 hours, 24 hours and 168 hours. The assay was carried out with five groups: the group with only cells, cells + PEG, cells + acridine orange, cells + saffron and cells + PEG + orange acridine. In the rheological analysis, the same groups were tested, noting that both the viscosity and the flow were not altered in the presence of PEG, AA and saffron. In cell viability, all groups were homogeneous, with a viability index greater than 90%. In the phagocytosis analysis it was observed for the concentrations of ng / mL without PEG (33.74 ± 0.50) and with PEG (36.98 ± 0.27) these did not differ (p <0.05). However, when we analyzed the groups on the pg / mL scale (p <0.0001), we noticed a difference between the groups with PEG (41.28 ± 0.41) and without the presence of the polymer (50.11 ± 0.56). Analyzing the phagocytosis of the Cells + EPEC group (17.6 ± 2.30) with the group containing cells, turmeric and EPEC (48.8 ± 6.97), this showed high phagocytosis rates compared to the control group (cells + EPEC).

For the analysis of the microbicidal index, the same groups analyzed in phagocytosis were used, where there was no significant difference between the groups analyzed with p> 0.05. In the anion and SOD analyzes, there is also no significant difference, only the SOD of the group with saffron shows a difference (p <0.05). These results demonstrate the polyethylene glycol (PEG) adsorbed to the acridine orange dye in the pg / mL concentration and showed a modified release for up to 168 hours and do not interfere with cellular processes and that the saffron of the earth fulfills the role of cellular dye, but interferes in some activities biological factors, such as phagocytosis and SOD, emphasizing the importance of further studies for its use.