اعتبارسنجی بین‌آزمایشگاهی سیزده روش qPCR برای تعیین مقدار مواد افزودنی غیرمجاز در ادویه‌ها و سبزیجات معطر

ادویه‌ها و گیاهان خوراکی در برابر اقدامات متقلبانه‌ای که ترکیبات اصلی آنها را تغییر می‌دهند یا جایگزین می‌کنند، آسیب‌پذیر هستند. اخیراً، ما یک اعتبارسنجی داخلی از سی روش واکنش زنجیره‌ای پلیمراز کمی (qPCR) در زمان واقعی با هدف تشخیص و تعیین کمیت پنج تقلب اصلی شش ادویه و گیاه رایج مصرفی: پاپریکا/فلفل چیلی، زردچوبه، زعفران، زیره، پونه کوهی و فلفل سیاه انجام دادیم. هر یک از سیزده روش qPCR که تمام معیارهای اعتبارسنجی داخلی را برآورده می‌کردند، در یک آزمایش بین آزمایشگاهی شامل پانزده آزمایشگاه اروپایی بیشتر مورد آزمایش قرار گرفتند. برای هر روش، شرکت‌کنندگان الگوهای DNA از مخلوط‌های دوتایی را برای پنج نمونه استاندارد به همراه پنج نمونه آزمایشی با غلظت تقلب ناشناخته دریافت کردند. پارامترهای اعتبارسنجی بین آزمایشگاهی شامل تکرارپذیری، تکرارپذیری و صحت بود. عدم قطعیت‌های اندازه‌گیری، محدودیت‌های تشخیص و محدودیت‌های تعیین کمیت نیز تعیین شدند. پس از بررسی داده‌ها و حذف داده‌های پرت، انحراف معیار تکرارپذیری نسبی از 4% تا 25%، انحراف معیار تکرارپذیری نسبی از 6% تا 25% و سوگیری صحت از 11%- تا 27% متغیر بود. بنابراین، سیزده روش qPCR کاملاً معتبر هستند و می‌توانند در استانداردهای بین‌المللی برای استقرار در آزمایشگاه‌های کنترل رسمی گنجانده شوند.

Culinary spices and herbs are vulnerable to fraudulent practices adulterating or substituting their authentic composition. Recently, we conducted an in-house validation of thirty real-time quantitative polymerase chain reaction (qPCR) methods aiming at detecting and quantifying the top five adulterants of six commonly consumed spices and herbs: paprika/chilli, turmeric, saffron, cumin, oregano and black pepper. Each of the thirteen qPCR methods meeting all the in-house validation criteria have been further tested in an interlaboratory trial including fifteen European laboratories. For each method the participants received DNA templates of binary mixtures for five standard samples together with five test samples of unknown adulterant concentration. Interlaboratory validation parameters included repeatability, reproducibility and trueness. Measurement uncertainties, limits of detection and limits of quantification were also determined. After data examination and outlier removal, relative repeatability standard deviation ranged from 4% to 25%, relative reproducibility standard deviation ranged from 6% to 25% and trueness bias ranged from − 11% to 27%. The thirteen qPCR methods are therefore fully validated and may be included in international standards for deployment in official control laboratories.