P2-008: سائوسورا لاپا و پلی‌فنول‌های زعفران به‌عنوان منبعی برای درمان‌های بیماری آلزایمر

پس‌زمینه بیماری آلزایمر (AD) یک دمانس چندعاملی است که با رشته‌های پیچ‌خورده و بیش‌فسفریله شده پروتئین تاو (گره‌های نوروفیبریلاری) در درون نورون‌ها در نواحی مغزی مرتبط با یادگیری و حافظه (مثلاً قشر مغز، هیپوکامپ، هسته بازال ماینت) شناخته می‌شود. پلی‌فنول‌ها پتانسیل درمانی برای درمان انواع اختلالات عصبی‌تخریبی نشان داده‌اند. مطالعات مختلف نه تنها پتانسیل آنتی‌اکسیدانی آن‌ها را تأیید کرده‌اند، بلکه پتانسیل چندهدفی آن‌ها که از طریق مسیرهای مختلف عمل می‌کند را نیز نشان داده‌اند. جدا از نقش آن در انتقال سیناپسی کولینرژیک، آنزیم استیل کولین استراز (AChE) همچنین شناخته شده است که تجمع Aβ را در مراحل اولیه AD تسریع می‌کند، عمدتاً از طریق تعاملات با سایت پیوند آنیونی محیطی آن. در این زمینه، نیاز فوری به مهارکننده‌های AChE وجود دارد که بتوانند به صورت همزمان با سایت کاتالیتیک و سایت پیوند آنیونی تعامل داشته باشند.اگرچه با مصرف داروهای مختلف مورد تأیید FDA مانند دونپزیل و ریواستیگمین، بهبود عملکرد شناختی بیماران مبتلا به آلزایمر مشاهده شده است، اما پیشرفت بیماری همچنان متوقف باقی مانده است. فلاونوئیدهای غذایی خواص محافظت‌کننده عصبی دارند که شامل اثرات مختلفی بر مغز، از جمله محافظت از نورون‌ها در برابر آسیب و تقویت حافظه، یادگیری و عملکرد شناختی است. بنابراین، به طور اصولی، فلاونوئیدها می‌توانند به عنوان یک کلاس کلیدی مولکول‌ها برای توسعه درمان‌های آلزایمر مورد استفاده قرار گیرند.روش‌ها
فعالیت استیل‌کولین استراز (AChE) با استفاده از روش المن (Ellman) و تطبیق آن با آزمایش در صفحه میکروتیتر اندازه‌گیری شد. عصاره‌های زعفران/کودوس در غلظت‌های مختلف (10، 5، 2.5، 1.25، 0.62، 0.31 میلی‌گرم/میلی‌لیتر) و کورستین (230، 115، 57.5، 28.7، 14.3 میکرومول) در بافر Tris-Cl (pH 8.0) حل شدند که غلظت نهایی DMSO از 1% تجاوز نمی‌کرد. به هر چاهک از صفحه ۹۶ خانه‌ای، 100 میکرولیتر DTNB با غلظت 3 میلی‌مولار، 20 میکرولیتر AChE با فعالیت 0.26 واحد/میلی‌لیتر و 40 میکرولیتر بافر (Tris-Cl 50 میلی‌مولار، pH 8.0) اضافه شد و 20 میکرولیتر از نمونه‌های آزمایشی با غلظت‌های مختلف به چاهک‌ها اضافه گردید.

Background
Alzheimer’s disease (AD), is a multifactorial dementia characterized by intraneuronal hyper phosphorylated twisted filaments of tau protein (neurofibrillary tangles) in brain areas associated with learning and memory (e.g., cortex, hippocampus, nucleus basalis of Meynert). Polyphenols have been found to have therapeutic potential for treating various neurodegenerative disorders, Various studies have conformed not only the antioxidant potential, but their multi-targeted potential interacting via various pathways. Apart from its involvement in cholinergic synaptic transmission, AChE, is also known to accelerate the aggregation of Aβ during the early stages of AD, primarily via interactions through its peripheral anionic binding site. In this context, there is dire need of AChE inhibitors which can interact simultaneously to the catalytic as well as anionic binding site. Even though, by administering various approved drugs by the FDA viz., donepezil and rivastigmine, there has been an improvement in the cognitive function of AD patients yet disease progression remains standstill. Dietary flavonoids exhibit neuroprotective properties that involve several effects on the brain, including the protection of neurons against injury and promotion of memory, learning and cognitive function. Therefore, in principle, flavonoids could serve as a key class of molecules for the development of therapeutics for AD.
Methods
Acetylcholinesterase (AChE) activity was measured following the Ellman’s method adapted to a microtiter plate assay. The saffron/lappa extracts in various concentrations (10, 5, 2.5, 1.25, 0.62, 0.31 mg/mL), Quercetin (230, 115, 57.5, 28.7, 14.3 μM) dissolved in Tris-Cl (pH 8.0) buffer with the final concentration of DMSO not exceeding 1%. To the 96 well plate added 100 μl of 3 mM DTNB, 20 μl of 0.26 U/ml of AChE, and 40 μl of buffer (50 mM tris-Cl pH 8.0), 20 μl of various concentrations of test samples were added to the wells.
Results
Among methnolic extracts, the saffron extract at 10 mg/mL completely inhibited the AChE activity whereas lappa extract at the same concentration showed 23 % of AChE inhibition.
Conclusions
Taken together, the present in vitro evaluation of the methanolic extracts of Saffron (stigma) and lappa showed promising AChE inhibition.