کروسین با هدف قرار دادن HSP90، پیروپتوز سلول‌های سرتولیِ با واسطه NLRP3/Caspase-1 را مهار می‌کند.

پایروپتوز (Pyroptosis)، نوعی مرگ برنامه‌ریزی‌شده سلولی پیش‌التهابی که توسط اینفلامازوم NLRP3 واسطه‌گری می‌شود، اخیراً در آسیب التهابی سلول‌های سرتولی دخیل شناخته شده است. کروسین، یک گلیکوزید کاروتنوئیدی محلول در آب است که از گیاهان *Crocus sativus* L. و *Gardenia jasminoides* Ellis استخراج می‌شود و دارای خواص ضدالتهابی، آنتی‌اکسیدانی و ضدآپوپتوزی است؛ با این حال، نقش آن در پایروپتوز سلول‌های سرتولی همچنان نامشخص است. در این مطالعه، ما اثرات فارماکولوژیک و مکانیسم‌های کروسین را در تنظیم بقا و پایروپتوز سلول‌های سرتولی رده TM4 بررسی کردیم. فارماکولوژی شبکه‌ای مبتنی بر اهداف کاندیدای مرتبط با الیگوآستنواسپرمی (OA)، همراه با روش داکینگ مولکولی، پروتئین HSP90AA1 را به عنوان یک هدف مولکولی مرتبط با تنظیم پایروپتوز سلول‌های سرتولی توسط کروسین شناسایی کرد. تحلیل MST نیز شواهدی مبنی بر اتصال مستقیم (target-engagement) میان کروسین و HSP90AA1 ارائه داد. در سلول‌های سرتولی TM4، کروسین موجب بهبود بقای سلولی و افزایش بیان Ki-67 شد و از پایروپتوز ناشی از لیپوپلی‌ساکارید/نیگریسین محافظت کرد؛ این امر با کاهش آزادسازی لاکتات دهیدروژناز، کاهش تعداد سلول‌های مثبت برای PI و کاهش بیان IL-1β، IL-18، NLRP3، Caspase-1 و GSDMD تأیید شد. علاوه بر این، در شرایطی که بیان HSP90AA1 افزایش یافته بود، کروسین تا حدی آسیب‌های مرتبط با پایروپتوز و بیان واسطه‌های التهابی را کاهش داد که این یافته‌ها نقش HSP90AA1 را در تنظیم پایروپتوز سلول‌های سرتولی توسط کروسین تأیید می‌کنند. در مجموع، این یافته‌ها نشان می‌دهند که کروسین تکثیر سلول‌های سرتولی را افزایش داده و پایروپتوز ناشی از اینفلامازوم را از طریق مکانیسمی مرتبط با HSP90AA1 تعدیل می‌کند. این یافته‌ها باید به عنوان شواهد اولیه درون‌تنی (in vitro) برای تنظیم تکثیر و پایروپتوز سلول‌های سرتولی توسط کروسین تلقی شوند و تأیید بیشتر آن‌ها در مدل‌های حیوانی و نمونه‌های بالینی ضروری است.

Pyroptosis, a proinflammatory form of programmed cell death mediated by the NLRP3 inflammasome, has recently been implicated in Sertoli cell inflammatory injury. Crocin, a water-soluble carotenoid glycoside derived from Crocus sativus L. and Gardenia jasminoides Ellis, exhibits anti-inflammatory, antioxidant, and anti-apoptotic properties, yet its role in Sertoli cell pyroptosis remains unclear. Here, we investigated the pharmacological effects and mechanisms of crocin in regulating TM4 Sertoli cell viability and pyroptosis. Network pharmacology based on oligoasthenospermia (OA)-related candidate targets, together with molecular docking, identified HSP90AA1 as a candidate molecular target associated with crocin-mediated regulation of Sertoli cell pyroptosis. MST analysis further provided target-engagement evidence supporting a direct interaction between crocin and HSP90AA1. In TM4 Sertoli cells, crocin improved cell viability, enhanced Ki-67 expression, and protected against lipopolysaccharide/nigericin-induced pyroptosis, as evidenced by reduced lactate dehydrogenase release, decreased PI-positive cells, and downregulated expression of IL-1β, IL-18, NLRP3, Caspase-1, and GSDMD. Moreover, under HSP90AA1-overexpressing conditions, crocin partially reduced pyroptosis-related injury and inflammatory mediator expression, supporting the involvement of HSP90AA1 in crocin-mediated regulation of Sertoli cell pyroptosis. Collectively, these findings indicate that crocin enhances Sertoli cell proliferation and mitigates inflammasome-driven pyroptosis through an HSP90AA1-associated mechanism. These findings should be interpreted as preliminary in vitro evidence for crocin-mediated regulation of Sertoli cell proliferation and pyroptosis, and further validation in animal models and clinical samples is required.