شناسایی لوکوس مناسب برای تشخیص مخصوص ناخالصی‌های بیولوژیکی زعفران

زعفران، که یکی از گران‌ترین کالاها است و پتانسیل بالای بازاری دارد، اغلب با سایر ناخالصی‌های بیولوژیکی که شباهت به زعفران دارند و معمولاً توسط روش‌های متداول تشخیص دشوار هستند، ناخالص می‌شود. برای ابداع یک روش کارآمد جهت شناسایی ناخالصی‌های بیولوژیکی (گلرنگ/گل جعفری) در زعفران، سه بارکد DNA سیتوپلاسمی و هسته‌ای مختلف یعنی ITS2، rbcLa و psbA-trnH و همچنین مارکرهای SCAR مبتنی بر PCR که قبلاً برای گونه/ناخالصی‌ها توسعه یافته بودند یعنی SAFL-4، SAFL-40، ScCt131، ScCO390 و ScCs263 در این مطالعه بررسی شدند. ناخالصی گلرنگ (0.5%) و گل جعفری (3%) در مخلوط‌های زعفران: گلرنگ/گل جعفری با جفت پرایمرهای SAFL-40 و ScCo390 به ترتیب قابل تشخیص بود.در واکنش زنجیره‌ای چندگانه (Multiplex PCR) با نشانگرهای SCAR برای تشخیص همزمان گلرنگ و زعفران، امکان تشخیص تا ۷٪ تقلب گلرنگ در مخلوط‌ها وجود داشت. در میان سه محل بارکدگذاری، بارکد psbA-trnH امکان تشخیص تقلب گلرنگ و کالاندولا در زعفران را با تولید آمپلیکون‌هایی با اندازه‌های متفاوت فراهم می‌کرد، در حالی که بارکد ITS2 آمپلیکون‌هایی با اندازه‌های مشابه تولید کرد و rbcLa نتایج تکرارپذیر نداد.

Saffron being one of the highest priced commodities and having high market potential is often adulterated with other biological adulterants which have resemblance to saffron and are often difficult to detect by conventional methods. To devise an efficient method for biological adulterant (safflower/Calendula) detection in saffron, three different cytoplasmic and nuclear DNA barcodes namely ITS2, rbcLa, and psbA-trnH and already developed species/adulterant-specific PCR-based SCAR markers namely SAFL-4, SAFL-40, ScCt131, ScCO390, and ScCs263 were tested in the present study. Adulteration of safflower (0.5%) and Calendula (3%) could be detected in saffron: safflower/Calendula admixtures with the primer pairs SAFL-40 and ScCo390, respectively. In multiplex PCR with SCAR markers for simultaneous detection of safflower and saffron, detection of up to 7% safflower adulteration was possible in admixtures. Among the three barcoding loci, the barcode psbA-trnH allowed the detection of safflower and Calendula adulteration in saffron by producing different size amplicons, whereas barcode ITS2 produced amplicons of similar sizes and rbcLa did not give reproducible results.