روش سریع و قوی LC-ESI-MS/MS برای تعیین همزمان آفلاتوکسین‌های B1، B2، G1 و G2 در ادویه‌های کم‌رطوبت: کاربرد در زعفران مراکشی …

آفلاتوکسین‌ها (AFs) به دلیل سمیت و سرطان‌زایی، خطر قابل توجهی برای سلامتی دارند و ادویه‌ها به ویژه در برابر آلودگی آسیب‌پذیر هستند. این مطالعه یک روش قوی LC-ESI-MS/MS را برای تعیین همزمان AFB1، AFB2، AFG1 و AFG2 در زعفران و رازیانه مراکشی (رطوبت کمتر از 15٪) توسعه داده و اعتبارسنجی می‌کند. آماده‌سازی نمونه بهینه شده، استخراج اصلاح‌شده QuEChERS (10 میلی‌لیتر ACN/آب، 50:50 v/v، 1٪ اسید استیک) را با پاکسازی µ-dSPE (200 میلی‌گرم MgSO4، 100 میلی‌گرم C18) ترکیب می‌کند و اثرات ماتریس را در مقایسه با پروتکل‌های مرسوم 40٪ کاهش می‌دهد. جداسازی کروماتوگرافی با استفاده از ستون C18 (150×3 میلی‌متر، 2.7 میکرومتر) با ESI+ در حالت MRM در 6 دقیقه به وضوح پایه رسید. این روش خطی بودن عالی (1-20 میکروگرم بر کیلوگرم، R2>0.995)، LOD پایین (0.26-0.37 میکروگرم بر کیلوگرم) و LOQ پایین (0.53-0.74 میکروگرم بر کیلوگرم) را نشان داد. بازیابی (n = 6) از 80 تا 118٪ (1-20 میکروگرم بر کیلوگرم) با RSD کمتر از 15٪ متغیر بود. عدم قطعیت گسترده (k = 2) کمتر از 50٪ بود، که مطابق با مقررات اتحادیه اروپا 2023/915 است. استحکام و کاربردپذیری از طریق آزمایش مهارت بین آزمایشگاهی، با نتایج دقیق و تکرارپذیر، بیشتر تأیید شد. نکته قابل توجه این است که این اولین گزارش از میزان آلودگی آفلاتوکسین در زعفران و رازیانه مراکشی است که غلظت‌هایی پایین‌تر از حد مجاز اتحادیه اروپا (5 میکروگرم بر کیلوگرم آفلاتوکسین B1، 10 میکروگرم بر کیلوگرم کل آفلاتوکسین‌ها) را نشان می‌دهد. این روش با موفقیت بر روی دانه‌های زعفران و رازیانه مراکشی اعمال شد و هیچ آلودگی آفلاتوکسین قابل تشخیصی را نشان نداد. توان عملیاتی (6 دقیقه در هر اجرا) و مقرون به صرفه بودن این روش، آن را برای نظارت معمول بر ایمنی مواد غذایی در محیط‌های با منابع محدود ایده‌آل می‌کند.

Aflatoxins (AFs) pose a significant health risk due to their toxicity and carcinogenicity, with spices being particularly vulnerable to contamination. This study develops and validates a robust LC-ESI-MS/MS method for the simultaneous quantification of AFB1, AFB2, AFG1, and AFG2 in Moroccan saffron and fennel (< 15% moisture). The optimized sample preparation combines a modified QuEChERS extraction (10 mL ACN/water, 50:50 v/v, 1% acetic acid) with µ-dSPE cleanup (200 mg MgSO4, 100 mg C18), reducing matrix effects by 40% compared to conventional protocols. Chromatographic separation achieved baseline resolution in 6 min using a C18 column (150 × 3 mm, 2.7 µm) with ESI+ in MRM mode. The method demonstrated excellent linearity (1–20 µg/kg, R2 > 0.995), low LODs (0.26–0.37 µg/kg), and LOQs (0.53–0.74 µg/kg). Recoveries (n = 6) ranged from 80 to 118% (1–20 µg/kg) with RSDs < 15%. Expanded uncertainty (k = 2) was < 50%, complying with EU Regulation 2023/915. Robustness and applicability were further confirmed through interlaboratory proficiency testing, with accurate and reproducible results. Notably, this is the first report of AF contamination levels in Moroccan saffron and fennel, revealing concentrations below EU limits (5 µg/kg AFB1, 10 µg/kg total AFs). The method was successfully applied to Moroccan saffron and fennel seeds, revealing no detectable aflatoxin contamination. The method’s throughput (6 min/run) and cost-efficiency make it ideal for routine food safety monitoring in resource-limited settings.